TCSPC的经典原则
张杰
TCSPC 在激光脉冲后的光子时间上建立光子分布
时间相关单光子技术(TCSPC)检测周期性光信号的单光子,并确定激发脉冲后光子的时间。
信号的脉冲重复率高于光子检测率。因此每个信号周期检测到多个光子的可能性极小。每个信号周期只需要考虑一个光子。在这些条件下,可以在极高的分辨率下确定该光子的时间。
从单个光子的时间开始,TCSPC在激发脉冲后的时间内建立光子的分布。光子分布表示光信号的波形。见上图。
TCSPC还具有许多其他突出的功能。首先,它实现了近乎理想的光子效率:探测器看到的每个光子最终都会进入光子分布,从而对结果做出贡献。其次,TCSPC达到了极高的时间分辨率。分辨率不受探测器的单光子响应的限制,就像模拟记录技术一样。相反,分辨率由探测器中电子的传输时间抖动给出。这可能比单光子脉冲的宽度小10到50倍。例如,bh TCSPC器件在半峰时实现了小于20ps全宽的仪器响应函数(IRF),其混合探测器的单光子响应宽度约为1ns。
bh TCSPC器件通过快速混合探测器
4.4ps IRF宽度,带单纳米线超导检测器
第三,使用bh TCSPC器件,即使是最快的IRF也可以在满足奈奎斯特的点密度下进行采样。由于时间通道宽度低至203fs,即使是最后一点时间信息也可以从记录信号中剔除。
第四,TCSPC达到了极高的动态范围和极高的线性度。实际上,动态范围受信号光子速率和背景计数率之比的限制。
在三个数量级上准确记录荧光衰减
高动态范围与高线性度相结合,使得分析多指数荧光衰减过程成为可能。对于生命科学中的应用来说,这是一个非常重要的特征:这些应用中的信息不直接存在于荧光衰变的表观时间中,而是存在于衰变的组成中,即衰变成分的持续时间和振幅。


肺组织的多光子显微镜图像。阿姆斯特丹大学Groot Vrije教授有限公司
图1:二光子和三光子效率与脉冲持续时间的关系







商业生产复杂、高精度的HOEs和逼真的真彩全息图通常需要多个高功率激光光源。这些激光源必须提供完美的TEM00光束,足够优秀的波长和功率稳定性,长相干长度,必须能够适应环境条件 [3]。这种激光器在商业上是可行的,但是多光源的光学对准和光束路径管理困难且耗时。校准和组合激光光源的工作可能会分散人们对制作HOEs和全息图这一本来就很有挑战性的工作的注意力。为了使这些技术更加商业化,多色、共线性、高性能的激光组合器必须能够适应各种环境条件。一种专用的高功率激光组合器提供了经过验证的稳定性能,消除了这些困难,促进了HOEs制造工艺的开发和全息图曝光优化。
图1:用于全息的二极管泵浦固态激光器原理图(上)和模式抑制原理图(下)。 [3]




















Argolight是一家法国的公司,专注于成像质量的控制,公司最初是为了解决NASA提出的请求,帮助他们保障国际空间站上的显微镜的准确性和可靠性,以达到验证显微镜质量且可以重复实验结果的目的。经过几年的努力,多代产品的更新,最终得到了NASA的认可,也亲眼见证了Argolight的产品搭乘着SpaceX的火箭,同宇航员一同进入了国际空间站。
Argolight的产品满足ISO 21073:2019 标准,该标准旨在用于评估共焦激光扫描显微镜图像性能的指标,用于荧光生物标本成像领域。并且积极与NIST合作,旨在为成像质量评估出一个标准。
接下来我们展示一个具体的Confocal.nl的案例,该案例使用 Argo-SIM 来展示其横向分辨率的优势。
使用 RCM1 技术以 60x 1.4 放大倍率获取的示例图像(2×2 拼接图像)。COS-7 细胞中的微管蛋白丝。 Andreas Kurz,德国维尔茨堡大学
Confocal.nl 使用 Argo-SIM 的荧光模式进行分辨率测量。 该图案呈现出成对的 36 μm 长线,其间距逐渐增加,从 0 到 390 nm,步长为 30 nm。存在四组线:一组垂直,一组水平,两组位于 + 和 – 45°







